Spektrofotometre Nedir ? Spektrofotometre Nerede Kullanılır ?

Spektrofotometre Nerede Kullanılır
Spektrofotometre Nedir ?  Spektrofotometre Nerede Kullanılır ? 

Bu yayınımızda Spektrofotometre NedirSpektrofotometre Nerede Kullanılır ? Spektrofotometre Özellikleri Nelerdir ?  gibi sorularınıza cevap bulabilirsininiz...

Spektrofotometre, birçok araştırma ve endüstriyel laboratuvarda yaygın olarak bulunan bilimsel araçlardan biridir. Spektrofotometreler fizik , moleküler biyoloji , kimya ve biyokimya laboratuvarlarında araştırma yapmak için kullanılır . Tipik olarak, bu isim Ultraviyole-Görünür (UV-Vis) Spektroskopisine atıfta bulunmaktadır . Spektrofotometreler, baskı ve kumaşlar için renkleri ayarlamak için kullanılır.

Işığın enerjisi , genellikle lambda olarak adlandırılan dalga boyuna bağlıdır . Elektromanyetik spektrum muazzam bir dalga boyu aralığına yayılmasına rağmen, çoğu laboratuvar bunların yalnızca küçük bir kısmını ölçebilir. UV-Vis Spektroskopisi, UV ışığı ölçümleri için 200 ila 400 nanometre (nm) arasında ve görünür spektrumda yaklaşık 750 nm'ye kadar ölçüm yapar.

UV-Vis Spektroskopisi için, numuneler genellikle küvet adı verilen küçük kaplarda tutulur ve ölçülür . Bunlar görünür spektrumda kullanılıyorsa plastik olabilir, ancak UV ölçümleri için kullanılıyorsa kuvars veya erimiş silika olması gerekir . Cam test tüplerini kullanabilen bazı makineler var.

Görünür spektroskopi, endüstriyel olarak genellikle kolorimetri için kullanılır. Bu yöntemi kullanarak, numuneler 400-700 nm'den çok sayıda dalga boyunda ölçülür ve absorbans profilleri bir standartla karşılaştırılır. Bu teknik, tekstil ve mürekkep üreticileri tarafından sıklıkla kullanılmaktadır. UV-Vis Spektroskopisinin diğer ticari kullanıcıları arasında adli tıp laboratuvarları ve yazıcılar bulunmaktadır.

Biyolojik ve kimyasal araştırmalarda, çözümler genellikle belirli bir dalga boyundaki ışık emilim dereceleri ölçülerek nicelendirilir.  Bileşiğin konsantrasyonunu hesaplamak için ekstinksiyon katsayısı adı verilen bir değer kullanılır . Örneğin, moleküler biyoloji laboratuvarları, DNA veya RNA örneklerinin konsantrasyonlarını ölçmek için spektrofotometreler kullanır . Bazen, geleneksel spektrofotometreler tarafından kullanılana kıyasla numune miktarının bir kısmını kullanan NanoDrop ™ spektrofotometre adı verilen gelişmiş bir makineye sahiptirler .

Spektrofotometre Nedir ?  Spektrofotometre Nerede Kullanılır ? 

Miktar belirlemenin geçerli olabilmesi için numunenin Beer-Lambert Yasasına uyması gerekir. Bu, absorbansın, küvetin yol uzunluğu ve bileşiğin absorpsiyonuyla doğru orantılı olmasını gerektirir. Hepsi olmasa da çoğu bileşik için mevcut olan yok olma katsayılarının tabloları vardır.

Çoğu kimyasal ve enzimatik reaksiyon zamanla renk değiştirir ve spektrofotometreler bu değişiklikleri ölçmek için çok kullanışlıdır. Örneğin, meyvenin kahverengileşmesine neden olan polifenol oksidaz enzimleri, fenolik bileşiklerin çözeltilerini oksitleyerek, berrak çözeltileri gözle görülür şekilde renkli olanlara dönüştürür. Bu tür reaksiyonlar, renk değiştikçe absorbanstaki artış ölçülerek test edilebilir. İdeal olarak, değişim hızı doğrusal olacaktır ve bu verilerden oranlar hesaplanabilir. Daha gelişmiş bir spektrofotometre, reaksiyonları enzim için ideal olan kesin bir sıcaklıkta gerçekleştirmek için sıcaklık kontrollü bir küvet tutucuya sahip olacaktır.

Mikrobiyolojik ve moleküler biyoloji laboratuvarları, bakteri kültürlerinin büyümesini ölçmek için sıklıkla bir spektrofotometre kullanır. DNA klonlama deneyleri genellikle bakterilerde yapılır ve araştırmacıların, belirli prosedürleri ne zaman gerçekleştireceklerini bilmek için kültürün büyüme aşamasını ölçmeleri gerekir. Bir spektrofotometre üzerinde optik yoğunluk (OD) olarak bilinen absorbansı ölçer. OD'den bakterilerin aktif olarak bölünüp bölünmediği veya ölmeye başladıkları söylenebilir.

Spektrofotometreler, bir monokromatör aracılığıyla bir dizi dalga boyunu parlatmak için bir ışık kaynağı kullanır . Bu cihaz daha sonra dar bir ışık bandı iletir ve spektrofotometre, numuneden geçen ışık yoğunluğunu bir referans bileşikten geçen ışık yoğunluğuyla karşılaştırır. Örneğin, bir bileşik etanol içinde çözülürse, referans etanol olacaktır. Sonuç, aralarındaki farkın absorbans derecesi olarak görüntülenir. Bu, numune bileşiğinin absorbansını gösterir.

Bu soğurmanın nedeni, hem ultraviyole hem de görünür ışığın, kimyasalları daha yüksek enerji seviyelerine uyarmak için yeterli enerjiye sahip olmasıdır. Bu uyarma, absorbans dalga boyuna karşı çizildiğinde görülebilen daha yüksek bir dalga boyu ile sonuçlanır. Farklı moleküller veya inorganik bileşikler, farklı dalga boylarında enerjiyi emer. Görülebilir aralıkta maksimum absorpsiyona sahip olanlar, insan gözüyle renklendirilmiş olarak görülür.

Bileşiklerin çözeltileri berrak olabilir, ancak UV aralığında emilebilir. Bu tür bileşikler genellikle çift bağlara veya aromatik halkalara sahiptir. Bazen, dalga boyuna göre absorpsiyon derecesi işaretlendiğinde bir veya daha fazla tespit edilebilir zirve vardır. Eğer öyleyse, bu, grafiğin şeklini bilinen referans grafikleriyle karşılaştırarak bazı bileşiklerin tanımlanmasına yardımcı olabilir.

İki tür UV-Vis spektrofotometre makinesi vardır, tek ışınlı ve çift ışınlı. Bunlar, referans ve test numunesi arasındaki ışık yoğunluğunu nasıl ölçtüklerine göre farklılık gösterir. Çift kirişli makineler referans ve test bileşiğini aynı anda ölçerken, tek kirişli makineler test bileşiğinin eklenmesinden önce ve sonra ölçüm yapar.

 

Spektrofotometre Nedir ?  Spektrofotometre Nerede Kullanılır ? 

Yorum Gönderme

0 Yorumlar

close